Видео: ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг цэвэршүүлэх зорилго юу вэ?
2024 Зохиолч: Miles Stephen | [email protected]. Хамгийн сүүлд өөрчлөгдсөн: 2023-12-15 23:39
Цэвэршүүлэх ДНХ-ийн а ПГУ урвал нь ихэвчлэн доод урсгалын хэрэглээнд зайлшгүй шаардлагатай бөгөөд фермент, нуклеотид, праймер болон буферийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг зайлуулахад тусалдаг. Уламжлал ёсоор үүнийг фенол хлороформын олборлолт, дараа нь этилийн спиртээр тунадасжуулах зэрэг органик олборлох аргуудыг ашиглан гүйцэтгэсэн.
Мөн ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг яагаад цэвэршүүлэх шаардлагатай вэ гэсэн асуулт гарч ирнэ.
Чи хэрэгтэй ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг цэвэршүүлэх залгаасын амжилтыг оновчтой болгохын тулд ашиглагдаагүй праймерууд, нуклеотидууд, ферментүүдээс салж, дарааллыг хадгалах болно. бүтээгдэхүүн -ийн ПГУ . руу ариусгах нь ПГУ-ын бүтээгдэхүүн , хэмжээ хасах хроматографийг ашигладаг.
Нэмж хэлэхэд, ПГУ-ын дараа би юу хийх ёстой вэ? Сэргээх хугацааг нэмэгдүүлэхийн тулд савыг 10-20 мкл TE буюу усаар хоёр удаа зайлна. Финал ПГУ урвал нь молекул биологийн төрөл бүрийн хэрэглээнд ашиглаж болох микрограмм хүртэл олшруулсан ДНХ агуулж болно. Эдгээр програмууд нь үлдэгдэл бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд бага эсвэл бага мэдрэмтгий байж болно ПГУ урвалын холимог.
Та ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг хэрхэн цэвэрлэх вэ?
Сонгодог аргуудыг ашигладаг цэвэрхэн дээш ПГУ-ын бүтээгдэхүүн дараалал тогтоохын өмнө гель электрофорез, этанолын тунадасжилт, баганын хроматографи орно. Хэдийгээр нэлээд үр дүнтэй боловч эдгээр аргууд нь олон дээжийг зэрэгцүүлэн боловсруулахад маш хурдан төвөгтэй болж, янз бүрийн түвшний алдагдлын хэмжээг харуулдаг.
Яагаад ДНХ-г цэвэрлэх ёстой вэ?
Бид цэвэрхэн дээш ДНХ усан уусмалаас доод урсгалын хэрэглээнд нөлөөлж болох буферийн давс, фермент эсвэл бусад бодисыг зайлуулах. Жишээ нь ПГУ-ын урвал орно цэвэрхэн дээш, цэвэрхэн хүртэл хязгаарлалт задаргаа болон цэвэрхэн геном эсвэл плазмидаас бүрддэг ДНХ эсийн уураг/хог хаягдлаар бохирдсон.
Зөвлөмж болгож буй:
ПГУ-д праймерууд ямар үүрэг гүйцэтгэдэг вэ?
ПГУ-ын праймерууд нь нэг судалтай ДНХ-ийн богино фрагментууд (урт нь 15-30 нуклеотид) бөгөөд энэ нь сонирхож буй зорилтот бүсийг хавсаргасан ДНХ-ийн дараалалд нэмэлт юм. ПГУ-ын праймерын зорилго нь ДНХ полимераза нь dNTP-ийг нэмж чадах "чөлөөт" 3'-OH бүлгийг өгөх явдал юм
ПГУ-ын 10 циклийн дараа ДНХ хэдэн хувь байдаг вэ?
Полимеразын гинжин урвал (ПГУ) Давхар хэлхээтэй ДНХ-ийн хэсгүүдийн тоо мөчлөг бүрт хоёр дахин нэмэгддэг тул n мөчлөгийн дараа та 2^n (n:-р хүчнээс 2) ДНХ-ийн хуулбартай болно. Жишээлбэл, 10 мөчлөгийн дараа та 1024 хувь, 20 мөчлөгийн дараа нэг сая хувь гэх мэт
Нүүрстөрөгчийн шилэн бүтээгдэхүүнийг хэрхэн хийдэг вэ?
Нүүрстөрөгчийн утас үйлдвэрлэх үйл явц нь хагас химийн ба хэсэгчлэн механик юм. Өмнөх бодисыг урт утас эсвэл утас руу татаж, дараа нь хүчилтөрөгчтэй харьцахгүйгээр маш өндөр температурт халаана. Хүчилтөрөгчгүй бол эслэг шатаж чадахгүй
ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг цэвэршүүлэх өөр аргууд байдаг уу?
ПГУ-ын цэвэрлэгээ эсвэл ПГУ-ын үр дүнг баталгаажуулах шаардлагатай эдгээр програмуудад ерөнхийдөө хоёр аргыг баримталдаг: ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг багана ашиглан тусгаарлах, агароз гелээс гель цэвэрлэх
ПГУ-ын мөчлөг гэж юу вэ?
Полимеразын гинжин урвал буюу ПГУ нь тодорхой ДНХ-ийн бүсийн олон хуулбарыг in vitro (организм гэхээсээ илүү туршилтын хоолойд) хийх арга техник юм. ПГУ-д урвал нь хэд хэдэн температурын өөрчлөлтөөр олон удаа явагддаг бөгөөд энэ нь зорилтот бүсийн олон хуулбарыг үйлдвэрлэх боломжийг олгодог