Агуулгын хүснэгт:
Видео: Гель электрофорезыг хэрхэн ачаалах вэ?
2024 Зохиолч: Miles Stephen | [email protected]. Хамгийн сүүлд өөрчлөгдсөн: 2023-12-15 23:39
Дээжийг ачаалж, агароз гель ажиллуулах:
- Нэмэх ачаалж байна ДНХ-ийн дээж бүрийн буфер.
- Хатуу болсны дараа агарозыг байрлуулна гель руу гель хайрцаг ( электрофорез нэгж).
- Бөглөх гель хүртэл 1xTAE (эсвэл TBE) бүхий хайрцаг гель хамрагдсан байна.
- Болгоомжтой ачаалал эхний эгнээ рүү молекул жинтэй шат гель .
Үүнтэй холбогдуулан гель электрофорез хийхэд хэр хэмжээний ДНХ ачаалах шаардлагатай вэ?
Хэмжээ Ачаалах ДНХ худаг бүрт хувьсах. Хамгийн бага хэмжээ ДНХ Этидум бромидын тусламжтайгаар илрүүлж болох хэмжээ нь 10 нг. ДНХ Нэг цооногийн хэмжээ 100 нг хүртэл байвал этидиум бромидын хурц, цэвэр туузан дээр будсан болно. гель.
Нэмж дурдахад, гель электрофорез хийхэд усны оронд буфер яагаад ашиглагддаг вэ? The буфер ДНХ-ийн уусмалын рН-ийг төвийг сахисан түвшинд ойр байлгахад шаардлагатай, учир нь энэ нь электролизийн явцад хүчиллэг болж хувирдаг. Электродын улмаас үүссэн цахилгаан гүйдэл нь үүсгэж болно ус молекулуудыг салгаж, H+ ионыг ялгаруулна.
Хүмүүс бас асуудаг, яагаад гель электрофорез хийхэд маркер хэрэглэдэг вэ?
Жижиг хэсгүүд нь могой дундуур өнгөрөхдөө том хэсгүүдээс илүү хурдан, тиймээс цааш хөдөлдөг гель . Яагаад маркер ашигладаг вэ? хэсгүүдийг дундуур нь ажиллуулах үед гель ? А тэмдэглэгээ мэдэгдэж байгаа хэмжээтэй ДНХ-ийн хэсгүүдийг агуулдаг. Маркерууд болгон ажиллуулдаг гель Үл мэдэгдэх хэсгүүдтэй харьцуулах зорилгоор бусад гель эгнээ.
Агароз гель дээр хэр хэмжээний ДНХ харагдах вэ?
Ихэнх агароз гель 0.7% -иас 2% хооронд хийгдсэн. 0.7% гель болно томоос сайн салгах (тодорхойлолт) харуулах ДНХ хэсгүүд (5-10 кб) ба 2% гель болно жижиг хэсгүүдэд (0.2-1 кб) сайн нягтралыг харуулах.
Зөвлөмж болгож буй:
Баганын хроматографид дээжийг хэрхэн ачаалах вэ?
Баганыг ачаалахдаа: Дээжийг уусгагчийн хамгийн бага хэмжээгээр (5-10 дусал) уусгана. Зузаан зүү бүхий соруур эсвэл тариур ашиглан дээжийг цахиурын дээд хэсэгт шууд дуслаарай. Дээжийг бүхэлд нь нэмсний дараа уусгагчийн түвшин цахиурын дээд хэсэгт хүрэхийн тулд баганыг шавхахыг зөвшөөрнө
Агароз гель хэрхэн хадгалах вэ?
9. Хэрэв танд агароз гель электрофорез хийх хангалттай хугацаа байхгүй бол гельээ хайрцагт хийж, 25 мл 1х TAE буферээр битүүмжилсэн гялгар уутанд хийж тасалгааны температурт 1 хоног, эсвэл хөргөгчинд (4°) хадгална. C) тэдгээрийг хэрэглэхээс өмнө 1 долоо хоног хүртэл. Гялгар уутныхаа шошгыг заавал бичээрэй
Гель электрофорезын зорилго юу вэ?
Гол санаа: Гель электрофорез нь ДНХ-ийн хэсгүүдийг хэмжээнээс нь хамааруулан ялгах арга юм. ДНХ-ийн дээжийг гельний нэг төгсгөлд байрлах нүхэнд (хоолой) ачиж, цахилгаан гүйдэл ашиглан гельээр дамжуулан татдаг. ДНХ-ийн хэсгүүд сөрөг цэнэгтэй тул эерэг электрод руу шилждэг
Гель электрофорез нь ДНХ молекулуудыг ялгахад ямар хүчин зүйл ашигладаг вэ?
Гель нь шигшүүр шиг ажилладаг бөгөөд янз бүрийн ДНХ молекулуудыг хэмжээнээс нь хамааруулан салгадаг тул жижиг ДНХ молекулууд том молекулуудаас илүү хурдан гельээр дамжин өнгөрөх чадвартай байдаг. ДНХ дамждаг гель дэх химийн бодис нь ДНХ-тэй холбогдож, хэт ягаан туяаны гэрэлд харагдана
Гель электрофорезийн эерэг ба сөрөг хяналт гэж юу вэ?
Эерэг ба сөрөг хяналт нь гель электрофорезийн туршилтын үнэн зөвийг батлахад ашигладаг дээж юм. Эерэг хяналт нь ДНХ эсвэл уургийн мэдэгдэж буй хэсгүүдийг агуулсан дээж бөгөөд гель дээр тодорхой замаар шилжих болно. Сөрөг хяналт нь ДНХ, уураг агуулаагүй дээж юм