Спектрофотометр ашиглан ДНХ-ийн концентрацийг хэрхэн тооцдог вэ?
Спектрофотометр ашиглан ДНХ-ийн концентрацийг хэрхэн тооцдог вэ?

Видео: Спектрофотометр ашиглан ДНХ-ийн концентрацийг хэрхэн тооцдог вэ?

Видео: Спектрофотометр ашиглан ДНХ-ийн концентрацийг хэрхэн тооцдог вэ?
Видео: Научное крещение без божественности! 2024, Арваннэгдүгээр
Anonim

ДНХ-ийн концентраци байна - аар тооцоолсон 260 нм-ийн гэрэл шингээлтийг хэмжиж, А-г тохируулна260 булингарыг хэмжих (- аар хэмждэг 320нм-д шингээх чадвар), үржих by шингэлэх хүчин зүйл, ба ашиглах харилцаа нь А260 1.0 = 50мкг/мл цэвэр dsDNA.

Хүмүүс бас ДНХ-ийн концентрац, цэвэр байдлыг яаж олох вэ гэж асуудаг.

Үнэлгээ хийх ДНХ-ийн цэвэр байдал , бусад болзошгүй бохирдуулагчийг илрүүлэхийн тулд 230нм-ээс 320нм хүртэл шингээх чадварыг хэмжинэ. Хамгийн түгээмэл цэвэр байдлын тооцоо Энэ нь 260 нм-ийн гэрэл шингээлтийг 280 нм-ийн уншилтанд хуваасан харьцаа юм. Сайн чанарын ДНХ А байх болно260280 харьцаа 1.7-2.0.

Үүний нэгэн адил ДНХ-ийн сайн концентраци гэж юу вэ? А сайн чанар ДНХ дээж нь А байх ёстой260280 харьцаа 1.7-2.0 ба A260230 харьцаа 1.5-аас их, гэхдээ эдгээр бохирдуулагчид янз бүрийн техникүүдийн мэдрэмтгий байдал өөр өөр байдаг тул эдгээр утгыг зөвхөн дээжийн цэвэр байдлын удирдамж болгон авах ёстой.

Үүнтэй холбогдуулан NanoDrop ДНХ-ийн концентрацийг хэрхэн тооцдог вэ?

Та 260 нм-ийн шингээлтийн утгыг тогтмол хүчин зүйлээр үржүүлнэ (энэ нь 50 байна. ДНХ ) мөн та авах болно ДНХ-ийн концентраци . Войла. (За энэ нь техникийн хувьд 50-аар үржүүлсэн 10 мм зузаантай дээжийн A260 загвар юм; NanoDrop Стандарт кювет шиг дээж нь 10 мм зузаантай мэт A260-ыг илэрхийлдэг).

Яагаад бид ДНХ-ийн хэмжээг тодорхойлохын тулд спектрофотометр ашиглах шаардлагатай болсон бэ?

А спектрофотометр нь нуклейн хүчлүүдийн дундаж концентрацийг тодорхойлох боломжтой ДНХ эсвэл холимогт агуулагдах РНХ, түүнчлэн тэдгээрийн цэвэр байдал. Ашиглаж байна Шар айраг-Ламбертын хууль байна шингээх гэрлийн хэмжээг шингээгч молекулын концентрацтай холбох боломжтой.

Зөвлөмж болгож буй: